چکیده:
مقدمه: سلول های بنیادی مزانشیمی حاصل از بند ناف یکی از بهترین منابع برای درمان های مبتنی بر سلول هستند. این سلول ها در شرایط کشت تمایزی، مورفولوژی سلول عصبی را نشان می دهند و مارکرهای عصبی را بیان می کنند. هدف از مطالعه حاضر تمایز سلو ل های بنیادی با استفاده از Activin A و Nicotinamide به سمت سلول های شبه عصبی می باشد.
مواد و روش ها: بند ناف نزدیک به جفت بریده، نمونه های کوچک تر (2-4 سانتی متری) تهیه شد و ژله وارتون جدا گردید. سلول های بنیادی از طریق روش اکسپلنت استحصال گردید و فنوتیپ سطح سلول توسط دستگاه فلوسیتومتری Dako و با نرم افزار FlowJo مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. سپس تمایز ادیپوژنیک و استئوژنیک سلول ها صورت گرفت. سلول ها در شرایط کشت تمایز عصبی قرار داده شد و به مدت 3 روز در محیط کشت RPMI تحت تیمار باActivin 20 μg/ml و 1/0%FBS قرار گرفته و سپس به مدت 7 روز تحت القای 10 میلی مولار nicotinamide، B27 2%و 1/0%FBS قرار گرفتند.
نتایج: 10-7 روز پس از کشت اکسپلنت، سلول های بنیادی مزانشیمی دوکی شکل مشاهده شد. ایمونوفنوتیپ سلول های بنیادی کشت شده برای مارکرهای مزانشیمی مانندCD 105 و CD 90 مثبت بود اما برای مارکرهای خون ساز CD34 و CD45 منفی بود.پس از القا در محیط کشت تمایزی ادیپوژنیک و استئوژنیک، قطرات چربی و رسوبات کلسیم در سلول ها مشاهده شد. سلول های شبه عصبی تمایزیافته به شکل سلول های هرمی شکل با زوائد نورونی ظاهر گردید. در طی القای عصبی، زوائد شبه اکسونی و دندریتی در برخی از سلول های دو قطبی و چند قطبی مشاهده گردید. همچنین در بین سلول ها تماس سلولی مستقیم شبه سیناپسی مشاهده گردید.
نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان داد کهActivin A و nicotinamide باعث القای تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی به سمت دودمان عصبی گردید.
Introduction: Umbilical cord derived mesenchymal stem cells (MSCs) are one of the best sources for cell-based therapies. MSCs reveal the neuronal morphology and expression of neuronal marker in differentiation conditions. The aim of the present study was to differentiate of MSCs into neuron-like cells using Activin A and nicotinamide.
Methods: Umbilical cords were cut close to the placenta and smaller pieces (2-4 cm) of umbilical cords prepared and Wharton's jelly extracted. MSCs were isolated by an explant culture method and surface phenotype of cells analyzed by Dako flow cytometry and the FlowJo software. MSCs were then induced for osteogenic and adipogenic differentiation. Cells were exposed to neuronal differentiation condition and treated with 20 μg / ml Activin A and 0.1% FBS for 3 days in RPMI،then with 10 mMnicotinamide، 2% B27 and 0.1% FBS for 7 days.
Results: spindle-shaped MSCs were observed after 7-10 days of explants culture. Immunophenotype of cultured MSCs were positive for mesenchymal markers such as CD105 and CD90 but negative for hematopoietic markers such as CD34 and CD45. After MSCs differentiation to the osteogenic or adipogenic lineage، lipid droplets and calcium deposition were observed. The differentiated neural-like MSCs were appeared as pyramidal nerve-like cells with neuritis.
Some of th cells. During neuronal differentiation، axon and dendritic like process wereosbserved in some of Bipolar and mulipolarmulipolar cells. Furthermore direct synaptic like contacts were observed between cells.
Conclusion: The present study showed that Activin A and nicotinamide could induce differentiation of MSCs into neural lineage.