چکیده:
هپاتیت یک بیماری است که کبد را متورم کرده و فعالیت آن را مختل میسازد. اغلب از راه تزریق خون آلوده و فراورده های
خونی آلوده منتقل میشود. با وجود در دسترس بودن واکسن جهانی، عفونت ویروس هپاتیت Bتاثیر زیادی بر سلامت عمومی
در سراسر جهان دارد و تشخیص دقیق و به موقع عفونت HBV مورد نیاز است . تحولات سریعی در روش های تشخیصی و
پایش عفونت HBV، ازجمله روش های سرولوژی و مولکولی ایجاد شده است . آزمایش کیفی سطح آنتی ژن هپاتیت B
(HBsAg) مدت طولانی است که به عنوان یک نشانگر تشخیصی برای افراد آلوده به HBV عمل میکند. اخیرا، از سطح
HBsAg برای پیش بینی نتیجه درمان در اوایل درمان استفاده شده است . بااین حال ، شناسایی موارد مثبت HBV DNA که
HBsAg قابل تشخیص ندارند، استفاده از آزمایشات مولکولی را تشویق کرده است همچنین از سوی دیگر تشخیص کمی
ویروس در روند درمان و دارویی بسیار موثر میباشد. ازاین رو، هدف ما از تحقیق طراحی و توسعه Dual-probe Real
Time PCR جهت شناسایی کمی ویروس هپاتیت B بوده است . برای این مقاله ابتدا ٥ نمونه هپاتیت B از مراکز
آزمایشگاهی تهیه و پرایمرها، پروب ها و کالیبراتور مناسب با رقت ١٠٠،١٠٠٠،١٠٠٠٠ تهیه گردید و تکنیک -Realtime
PCR با برنامه دمایی بهینه شده و مقادیر واکنش مناسب انجام شد و در نهایت نتایج بدست آمده از تحقیق ما با کیت مورد
استفاده Genrproof در آزمایشگاه ها مقایسه گردید. نتایج حاصل از کار ما نشان داد که سیستم پرایمر و پروب طراحی شده
با فرمت هیدرولیز کارایی خوب و مناسبی برای تشخیص کمی ویروس هپاتیت B دارد و همچنین طراحی و ساخت کالیبریتور
و تبدیل عددی آن هم از صحت مناسبی برخوردار میباشد و میتوان از این سیستم در شناسایی Viral Load در مراکز بالینی استفاده نمود.
خلاصه ماشینی:
براي اين مقاله ابتدا ٥ نمونه هپاتيت B از مراکز آزمايشگاهي تهيه و پرايمرها، پروب ها و کاليبراتور مناسب با رقت ١٠٠،١٠٠٠،١٠٠٠٠ تهيه گرديد و تکنيک -Realtime PCR با برنامه دمايي بهينه شده و مقادير واکنش مناسب انجام شد و در نهايت نتايج بدست آمده از تحقيق ما با کيت مورد استفاده Genrproof در آزمايشگاه ها مقايسه گرديد.
نتايج حاصل از کار ما نشان داد که سيستم پرايمر و پروب طراحي شده با فرمت هيدروليز کارايي خوب و مناسبي براي تشخيص کمي ويروس هپاتيت B دارد و همچنين طراحي و ساخت کاليبريتور و تبديل عددي آن هم از صحت مناسبي برخوردار ميباشد و ميتوان از اين سيستم در شناسايي Viral Load در مراکز باليني استفاده نمود .
علاوه بر اين ، روش هاي مبتني بر اسيد نوکلئيک در تعيين کمي سطح HBV DNA در بيماران ، براي ارزيابي مرحله تکثير و اثربخشي درمان ضد ويروسي بسيار مهم است ؛ و در اين تحقيق هدف ما طراحي و توسعه Dual-probe Real Time PCR جهت شناسايي کمي ويروس هپاتيت B بود که شناسايي کمي اين ويروس در مراحل درماني بيماران هپاتيت B بسيار مهم ميباشد.
در اين تحقيق انها از سنجش real-time PCR براي کمي سازي HBV DNA با تکنيک TaqMan و پروب هاي MGB استفاده کردند.
نتايج تحقيقات بالا نشان داد تکنيک هاي مورد استفاده توسط اين محققين به خوبي توانسته تشخيص کمي ويروس هپاتيت B را انجام دهند که همه انها با استفاده از تکنيک real-time PCR و طراحي پرايمرها و پروب هاي مناسب انجام شده اند.